O processo de extração de DNA é uma etapa crucial para o exame de identificação genética. O presente estudo tem por objetivo verificar a eficiência do protocolo de extração por meio da resina Chelex® 100 em amostras de referência de sangue com vistas à obtenção de DNA em quantidade e qualidade suficientes para a genotipagem, sem a necessidade de quantificação prévia. Foram utilizadas amostras de sangue total de 6 (seis) voluntários e, posteriormente, coletados suabes (por meio de imersão em tubo com sangue) para proceder à metodologia de extração por Chelex® 100. Em seguida, os produtos de extração foram quantificados, efetuou-se o cálculo da média e desvio padrão dos valores encontrados e, logo após, realizou-se a amplificação de todos os eluídos com o volume médio obtido no cálculo. Foi analisada a qualidade dos eletroferogramas das amostras amplificadas e calculada a taxa de retrabalho para a amostragem do estudo (razão do número de amostras com necessidade de reamplificação pelo número de amostras totais). Os resultados encontrados demonstraram que a utilização de 1 µL do DNA extraído por Chelex® 100, sem diluição, foi suficiente para a obtenção de perfis genéticos interpretáveis. Por fim, foi possível demonstrar que a etapa experimental da validação da extração de DNA a partir de suabes com sangue de referência por Chelex® 100 encontra-se concluída no Serviço de Perícias em Genética Forense da Polícia Federal, podendo, assim que completada as demais etapas documentais da validação, ser realizada com celeridade e eficiência, uma vez que o DNA obtido apresentou quantidade e qualidade suficientes para ser amplificado e genotipado, de acordo com os requisitos do Laboratório.
The DNA extraction process is a crucial step in the genetic identification test. The present study aims to verify the efficiency of the extraction protocol using Chelex® 100 resin in blood reference samples in order to obtain DNA in sufficient quantity and quality for genotyping, without the need for quantification procedures. Blood samples from 6 (six) volunteers were used and, subsequently, swabs were collected (by immersion in the tube containing blood) to carry out the extraction procedure by Chelex® 100. Then, the quantification of each extraction product, calculation of the average and standard deviation of the values were found and, thereafter, amplification of all eluates with the average volume obtained in the calculation was performed. The quality of the electropherograms of amplified samples was analyzed and the rework rate for the study sample was calculated (number of samples to be reamplified divided by the number of total samples). The results showed that the use of 1 µL of DNA extracted by Chelex method was sufficient to obtain reference genetic profiles. Finally, we demonstrated that the DNA extraction in swabs with blood reference samples by Chelex® 100 has the experimental stage of its validation concluded at the Laboratory of Forensic Genetics of the Brazilian Federal Police and can, once validated, be performed with speed and efficiency, since the DNA obtained presented sufficient quantity and quality to be amplified and genotyped, in accordance with the Laboratory requirements.
El proceso de extracción de ADN es un paso crucial en la prueba de identificación genética. Este estudio tiene como objetivo verificar la eficiencia del protocolo de extracción mediante resina Chelex® 100 en muestras de sangre de referencia para obtener ADN en cantidad y calidad suficiente para el genotipado, sin necesidad de procedimientos de cuantificación. Se utilizaron muestras de sangre de 6 (seis) voluntarios y, posteriormente, se recolectaron hisopos (por inmersión en el tubo con sangre) para realizar el procedimiento de extracción mediante Chelex® 100. Luego, se realizó la cuantificación de cada producto de extracción, cálculo del promedio y desviación estándar de los valores encontrados y, después, amplificación de todos los eluatos con el volumen medio obtenido en el cálculo. Se analizó la calidad de los electroferogramas de las muestras amplificadas y se calculó la tasa de retrabajo de la muestra del estudio (número de muestras que necesitaban reamplificación dividido por el número de muestras totales). Los resultados encontrados mostraron que el uso de 1 µL de ADN extraído por Chelex, sin dilución, fue suficiente para obtener perfiles genéticos de referencia. Finalmente, demostramos que la extracción de ADN a partir de hisopos con sangre de referencia utilizando Chelex® 100 ha alcanzado la etapa de validación experimental culminada en el Servicio Pericial de Genética Forense de la Policía Federal de Brasil, y puede, una vez validada, realizarse con rapidez y eficiencia, ya que el ADN obtenido fue en cantidad y calidad suficiente para ser amplificado y genotipado, de acuerdo con los requerimientos del Laboratorio.
